超表达卵母细胞特异性连接组蛋白(H1foo)对猪诱导多能性干细胞(iPSCs)诱导效率的影响

摘要

卵母细胞特异性连接组蛋白(oocyte-specific linker histone,H1foo)是组蛋白家族的成员之一,特异性地定位于哺乳动物卵母细胞和早期胚胎中.在小鼠(Mus musculus)、牛(Bos taurus)和猪(Sus scrofa)等体外受精和体细胞核移植过程中均存在H1foo与其它成分的置换,并且这种置换有利于供核体细胞染色质构象的打开,实现基因组的完全重编程,恢复全能性.为了探索H1foo在诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)的过程中对iPSCs诱导效率的影响,本研究基于对猪H1foo的已有研究积累,选取猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast cell,PFF),构建能同时表达八聚体转录因子-4(octamer-binding transcription factor-4,OCT4)、性别决定基因相关转录因子-2(SRY-related high-mobility-group(HMG)-box protein-2,SOX2)、Kruppel样转录因子(kruppel-like factor-4,KLF4)和禽髓细胞瘤病病毒原癌基因(cellular homologue of avian myelocytomatosis virus oncogene,c-MYC)四因子(OSKM)的强力毒素(doxycycline,DOX)调控载体,利用电转的方法在OSKM-PFF中瞬时表达猪pVenus-H1foo后添加DOX开启重编程,瞬时表达猪H1foo,转染得到稳定的OSKM-PFF.通过对所获得克隆进行鉴定,并对所获iPSCs克隆数进行统计分析,结果发现,转染有猪pVenus-H1foo和空载体pVenus的OSKM-PFF细胞中的碱性磷酸酶阳性克隆数目无显著差异.本研究首次证明H1foo对猪iPSCs的诱导效率无显著影响,这为进一步研究体细胞核移植与iPSCs诱导这两种重编程手段的内在机制提供了基础资料.