不同转座子介导的基因捕获效率比较

摘要

为了比较SB(Sleeping Beauty)、PB(PiggyBac)和Tol2 3种转座子介导的基因捕获效率,本研究构建了含有3种转座子的启动子捕获载体pT3-PST-Pro-Trap.将此载体分别和SB、PB和Tol2 3种转座酶mRNA按照质量比1.0∶1.5的比例注射斑马鱼(Danio rerio)一细胞胚胎,通过检测绿色荧光蛋白报告基因(GFP)的表达水平比较不同转座子的捕获效率.结果显示,3种转座子介导的启动子捕获载体能够高效率捕获内源基因启动子,进而驱动GFP的表达;注射后培养36h时的SB、PB和Tol2捕获效率分别为24.32％、30.70％和18.87％,PB捕获效率显著高于SB和Tol2(P＜0.05);3种转座子在60h时的捕获效率均高于36h的,其中SB和Tol2组差异达显著水平(P＜0.05),而PB组差异不显著(P＞0.05).本研究结果表明,SB、PB和Tol2转座子介导的基因捕获技术可以用于脊椎动物高通量功能基因筛选,为功能基因研究提供有效新方法.