肺炎链球菌耐药相关基因的表达及其蛋白的纯化和功能分析

摘要

由于抗生素的大量使用和滥用,肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)出现了耐药性,甚至是多重耐药性,因此开发新的抗生素和疫苗迫在眉睫.为深入了解肺炎链球菌的耐药机制,从而为开发新的抗生素和疫苗提供依据,本研究从肺炎链球菌TIGR4菌株中克隆1个耐药相关基因SP_0010(GenBank登录号:A0A0H2UMY6-1)至表达载体pET28a(+)中,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3)菌株,实现基因SP_ 0010的异源表达.通过蛋白电泳结果显示,该重组蛋白Sp_0010的最佳诱导温度为16℃;镍柱纯化条件为20 mmol/L咪唑除杂蛋白,250 mmol/L咪唑洗脱重组蛋白.亲和层析后的重组蛋白Sp0010在溶液状态为单体,且纯度较高;而肽聚糖结合实验揭示重组蛋白Sp_0010能结合肽聚糖,且与去磷壁酸的肽聚糖结合能力更强.该研究揭示了蛋白Sp_0010与肺炎链球菌肽聚糖代谢相关,为后续阐明其在肺炎链球菌耐药机制的作用提供了数据支持.