牦牛颗粒细胞体外培养及FGF-10对其DBI表达的影响

摘要

地西泮结合抑制因子(diazepam binding inhibitor,DBI)与细胞脂肪酸代谢密切相关,而脂肪酸参与卵母细胞成熟和卵泡发育。为探索其介导的母源分泌因子调控牦牛(Bos grunniens)卵巢发育和卵母细胞成熟的潜在生物学作用,本研究通过分离与建立牦牛颗粒细胞体外培养体系,体外培养过程中加入不同浓度外源性成纤维细胞生长因子10(fibroblast growth factor-10,FGF-10)(0,20,50,100,150,200 ng/mL)作用不同时间后(12,24 h)。采用qPCR、蛋白免疫印迹技术(Western blot,WB)和免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)从基因和蛋白水平检测不同浓度FGF-10对颗粒细胞DBI表达的影响。研究成功建立了原代牦牛颗粒细胞分离与培养体系,具体为:颗粒细胞接种密度4×10^(5)个/mL,DMEM/F12培养基+12%FBS+100 U/mL链霉素+100 U/mL青霉素,36 h换液1次,细胞的纯度高达95%;100 ng/mL FGF-10作用牦牛颗粒细胞12 h时,DBI基因和蛋白表达水平最高,24 h各处理组DBI表达水平降低,免疫荧光显示各处理组颗粒细胞的细胞核和细胞质均可表达DBI蛋白。结果表明FGF-10参与调控牦牛颗粒细胞DBI的表达,并且具有浓度依赖性和时间差异性。本研究为进一步探索母源细胞因子调控卵母细胞成熟的多重生物学机制提供了理论依据。