外源添加17β-雌二醇对牦牛输卵管上皮细胞DBI表达的影响

摘要

地西泮结合抑制因子(diazepam binding inhibitor,DBI)在动物组织广泛表达,与细胞脂肪酸代谢密切相关,而脂肪酸参与早期胚胎发育能量供应。[目的]为研究其介导的母源分泌因子调控牦牛输卵管上皮细胞物质代谢和哺乳动物早期胚胎能量供给之间的潜在生物学作用。[方法]试验通过分离并建立牦牛输卵管上皮细胞体外培养体系,培养过程中添加不同浓度外源性17β-雌二醇(0、1×10^(-6)、1×10^(-7)、1×10^(-8)、1×10^(-9)、1×10^(-10) moL/L),作用不同时间后(0、6、12、24、48、72 h)。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)从基因水平分别检测不同浓度17β-雌二醇对输卵管上皮细胞DBI表达的影响。[结果]试验成功建立了原代牦牛输卵管上皮细胞分离与培养体系:输卵管上皮细胞接种密度4×10^(5)个/mL,DMEM/F12培养基+10%FBS+100 U/mL链霉素+100 U/mL青霉素,24 h换液1次,细胞的纯度高达90%以上;1×10^(-7)moL/L 17β-雌二醇作用牦牛输卵管上皮细胞6 h时,DBI基因表达水平最高,其它各处理组DBI表达水平降低,免疫荧光显示各处理组输卵管上皮细胞的细胞核和细胞质均可表达DBI蛋白。[结论]17β-雌二醇参与调控牦牛输卵管上皮细胞DBI的表达,并且具有剂量依赖性和时间差异性,为进一步探索母源细胞因子调控输卵管上皮细胞的多重生物学机制提供了关键科学突破点。