密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞方法的优化

摘要

目的:对密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞的方法进行优化,以提高该方法分离骨髓单个核细胞的收率.方法:骨髓血40份,100 ml/份,分为常规组和优化组,每组20份.常规组骨髓与NS 1:1混合稀释后,直接通过Ficoll分离液分离单个核细胞;优化组通过先将骨髓血洗涤一次,加入等量NS充分吹打混匀,200目筛网过滤,保持细胞悬液和Ficoll分离液1:1的体积比进行分离操作.对每份分离得到的骨髓单个核细胞通过白细胞稀释液稀释后计数,计算单个核细胞的回收率.结果:常规组,分离后的白膜层有12份界面不清晰,同时均混有少量的红细胞.优化组,分离后的白膜层有3份界面不清晰,仅有极少的红细胞混入.两种方法收集的骨髓单个核细胞数比较,优化组多于常规组(P﹤0.01).结论:通过对密度梯度离心法的步骤进行优化,可提高骨髓单个核细胞的分离效果.