密度梯度离心法

摘要： 目的探讨不离心直接上游法精液优化对胚胎发育的影响。方法随机选取560例在本院行常规体外受精的患者,其中198例为精液处理为上游法,362例为精液处理为梯度离心法,比较两组间受精率、卵裂率、优质胚胎、囊胚形成率和优质囊胚率。结果两组在受精率、卵裂率、囊胚形成率及优质囊胚率方面并无统计差异(P>0.05),在优质胚胎率方面,上游组高于梯度离心组(44.98%vs 40.64%,P<0.05),差异有统计学意义。结论不离心直接上游法精液优化能够给胚胎发育产生积极影响,可有效提高优质胚胎率,且操作方法简单快捷,应用价值高。

摘要： 目的:通过超速离心法和密度梯度离心法分离小鼠血清来源外泌体,为今后研究选择适合的方法提供参考.方法:将18只昆明系小鼠雌雄各半分为3组,每组6只,其中两组分别用超速离心法及密度梯度离心法提取小鼠血清中外泌体.通过透射电子显微镜观察2种方法提取外泌体的形态结构.之后在不同日期对剩下1组同种系同日龄6只小鼠的血清利用超速离心法提取外泌体,对得到的外泌体与之前该方法得到的结果进行比较,检验超速离心法的重复性.结果:通过对2种方法提取到的外泌体进行观察,与密度梯度离心法相比,超高速离心法提取的外泌体浓度更高,杂质较少.结论:超高速离心法是更为可靠且有效的外泌体提取方法.

摘要： 目的:比较用密度梯度离心法、上游法、先密度梯度离心后上游法处理精液对体外受精-胚胎移植后胚胎结局的影响.方法:回顾性地分析在皖南医学院弋矶山医院生殖中心实施体外受精-胚胎移植的172例不孕症患者的临床资料.在这些患者中,采用密度梯度离心法处理男方精液的患者有33例(A组),采用上游法处理男方精液的患者有74例(B组),采用先密度梯度离心后上游法处理男方精液的患者有65例(C组).使用经过处理的精液实施体外受精-胚胎移植后,比较三组患者卵子的正常受精率、正常卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率、囊胚形成率、MⅡ卵受精率、卵子补救率和胚胎滞育率.结果:三组患者卵子的正常受精率、正常卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率、囊胚形成率相比,P>0.05.C组患者的MⅡ卵受精率高于A组患者和B组患者,P<0.05;其卵子补救率、胚胎滞育率均低于A组患者和B组患者,P<0.05.结论:在对不孕症患者实施体外受精-胚胎移植期间,与用密度梯度离心法、上游法处理男方精液相比,用先密度梯度离心后上游法处理男方精液,不但可以明显提高不孕症患者MⅡ卵的受精率,还可以增加其优质胚胎的数量,降低其卵子补救率和胚胎滞育率.

摘要： 目的:探讨骨髓间充质干细胞及其来源的微泡制备方法及在慢性肾衰竭中的修复机制,为慢性肾衰竭治疗提供方法.方法:①骨髓间充质干细胞制备.选择2只SD大鼠,取大鼠胫骨、股骨髓,利用密度梯度离心法完成单一核细胞分离,采用贴壁方法完成细胞的培养,采用流式细胞仪制备细胞表面特异性抗原,完成细胞的鉴定.②慢性肾衰竭模型制备及处理方法.选择2015年5月～2016年3月医院实验室进行试验的SD大鼠40只,取10只大鼠设为空白对照组,30只大鼠采用肾切除六分之五合并高盐饮食三个月方法建立大鼠慢性肾衰竭模型,随机数字法分为阳性对照组(n=10)、干细胞组(n=10)及微泡干预组(n=10).阳性对照组建模成功后不采取任何措施处理,干细胞组建模成功后采用移植制备的骨髓间充质干细胞进行治疗,微泡干预组移植骨髓间充质干细胞后采用超声微泡辐照,比较不同组大鼠慢性肾衰竭修复效果.结果:①细胞换液一次细胞纯化呈梭状、纺锤状,以旋涡方式生长,细胞贴壁后生长迅速,细胞传代一次需要3 d,经过三代培养后细胞数量相对较多;②流式细胞仪测定结果表明:对照组细胞表面CD29几乎不表达,而MSC细胞表面CD29阳性率为91.54％,符合骨髓间充质细胞表面特征;③Western blot法结果表明:HGF蛋白在4组相对分子量为82000部位存在特异性条带,而EGF蛋白则在4组相对分子量为5500部位存在特异性条带;④微泡干预组TNF-α水平低于干细胞组与阳性对照组(P<0.05),微泡干预组细胞黏附分子1水平高于干细胞组与阳性对照组(P<0.05);⑤阳性对照组建模后未经任何处理,肾脏损伤明显,存在大量炎性细胞;空白对照组未参与建模,肾脏组织完整,未见肾脏组织损伤,干细胞组修复30 d后肾脏损伤缓解,仍存在少许炎性细胞,微泡干预组修复后30 d肾脏组织损伤改善,未见炎性细胞.结论:采用全骨髓法能分离培养骨髓间充质干细胞,将频率为1 MHz、强度1.0 W/cm2脉冲超声辐照微泡用于慢性肾衰竭大鼠骨髓间充质干细胞修复中能抑制炎性反应.

摘要： 目的 分析密度梯度离心法联合上游法处理精液对精子功能的影响.方法 200份精液标本作为研究材料,根据材料编号不同随机分为对照组与实验组,各100份.对照组使用密度梯度离心法进行精液处理检测,实验组使用密度梯度离心法联合上游法进行精液处理检测,比较两种检测方法对精子功能的影响.结果 实验组样本存活率、活力以及形态均显著优于对照组,精子DNA碎片率明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).实验组样本精子DNA碎片指数(DFI)、高可染性精子指数(HDS)水平分别为(22.57±4.46)％、(13.89±2.24)％,均明显优于对照组的(13.21±3.18)％、(8.12±2.59)％,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 密度梯度离心法联合上游法具有较好的精液处理能力,有利于提高精子的存活率,且不会造成精子DNA损伤,在精液处理中发挥出了较好的应用及推广价值.

摘要： 目的：探讨密度梯度离心法优选精液行IUI的临床疗效.方法：采用密度梯度离心法制备精液行IUI338个周期,并对制备前后的精液进行常规分析、改良巴氏染色、混合抗球蛋白反应实验.结果：洗涤后的精子,其密度、活力、精子正常形态比率明显升高,精子畸形指数及精子包被抗体阳性率明显下降.结论：密度梯度离心法优选精液行IUI可增加受孕率.

摘要： 目的：西藏小型猪骨髓间充质干细胞的分离培养和纯化技术探讨。方法：对西藏小型猪分别进行骨髓获取、骨髓间充质干细胞分离、接种、培养以及传代。并测定骨髓间充质干细胞的生长活力。结果：利用密度梯度离心分离的原代细胞呈圆形且透明，接种后约fi小时开始贴壁，48-72小时开始变形，多数呈长梭形及多角形，且出现散在的集落样生长细胞，3-7d细胞数量迅速增多，部分呈漩涡状生长口第3代后细胞变得较为均质，到第10代细胞仍然生长状态良好。按照i:2-1:4传代，细胞密度大约为4x 104/cm2,可以5--7天传代一次，细胞生长快。MSCs复苏后进行台盼蓝染色，得到其复苏后存活率为85%;消化传代后(冻存前)MSCs进行台盼蓝染色，得其存活率为99%。说明冻存和复苏过程中，有部分细胞死亡，对细胞活力有一定影响。结论：本文获得的西藏小型猪MSCs复苏后的活力为85%，跟冻存前99%比较，有较大下降，说明冻存条件还有待改进。通过密度梯度离心法可以成功分离出西藏小型猪的MSCs；本方法获得的MSCs生长活力好，符合MSCs的基本生物学特性。

摘要： 本研究将鸡场分离的柔嫩艾美耳球虫野毒株增殖，利用蔗糖密度梯度离心法获得的子孢子，并与MDBK细胞共培养，检测入侵时间。用含有6%乙醇的DMEM完全培养基对MDBK细胞进行凋亡诱导，应用HE染色、吖啶橙染色、Annexin V/PI染色及DNA ladder电泳确认MDBK细胞的凋亡。乙醇诱导凋亡3h的MDBK细胞与柔嫩艾美耳球虫子抱子共培养1个小时后，利用HE染色和吖啶橙染色，观察入侵情况。未经凋亡诱导处理的MDBK细胞，在与子孢子共培养40分钟后，再利用含有6%乙醇的DMEM完全培养基诱导细胞凋亡，6h后利用HE染色观察细胞凋亡的情况。

摘要： 目的：探讨系统性红斑狼疮(Systemic lupuserythematosus，SLE)患者外周血中．T细胞的数量、亚群构成以及功能表型与健康人的异同，并考察其与疾病发生、发展及转归的关系，为T细胞与自身免疫性疾病的相关性研究奠定基础。rn 方法：采集SLE患者外周血，其中活动期SLE10例，稳定期SLE5例，以10例健康人为对照。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)；采用台盼兰染色、细胞计数法计算细胞数量；采用免疫荧光染色法和流式细胞术分析T细胞的亚群及分子标志物的表达；采用固相化anti-TCRγδ抗体(1g／ml)扩增法进行SLE患者和健康人外周血γδT细胞的体外扩增。rn 结论：SLE发病的过程中T细胞的数量和功能均发生了改变，提示T细胞可能参与了SLE的发生、发展和转归。

摘要： 目的：HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV基因组复制中间体mRNA和前基因组RNA的合成模板,可作为外周血单个核细胞(PBMCs)是台存在HBV复制的重要指标。通过对乙型肝炎病毒(HBV)复制患者PBMCs中HBV DNA和cccDNA的定量检测,证实HBV能感染PBMCs,探讨血清中HBV DNA和PBMCs中HBV DNA、cccDNA之间的关系,并观察HBVDNA和cccDNA在慢性乙型肝炎患者PBMCs中的分布情况。rn 方法：收集2005年10月至2006年3月中南大学湘雅医院感染病科门诊和住院的慢性乙型肝炎患者外周血标本58例。所有病例血清HBVDNA均阳性,诊断符合2000年9月第十次全国病毒性肝炎诊断标准。以Ficoll密度梯度离心法获取PBMCs,采用荧光PCR法定量检测PBMCs标本中总HBV DNA和cccDNA。数据利用 SPSS11.5软件进行统计学处理,PBMCs中总HBV DNA与cccDNA比值分析经对数化后采用直线回归分析。rn 结果：58份PBMCs标本中,65.5％(38158)PBMCs HBV DNA阳性,53.5％(31/58)PBMCs cccDNA阳性。但末次PBMCs洗涤液均未扩增出HBV DNA和cccDNA。PBMCs中HBV DNA和cccDNA之间(r=0.894,P＜0.001)、血清中HBV DNA和PBMCs中HBV DNA之间(r=0.666,P＜0.001)、血清中HBV DNA和PBMCs中cccDNA之间(r=0.520,P＜0.001)均存在正相关关系,同一患者PBMCs中总HBV DNA含量是cccDNA含量的16-4倍至2310.3倍。rn 结论：HBV复制患者PBMCs中cccDNA检测结果阳性,进一步证实HBV能感染PBMCs,并在其中复制;cccDNA水平与PBMCs内总HBV DNA水平正相关,提示细胞内HBV复制中间体cccDNA含量的增加,必将产生大量的病毒,加重血清HBVDNA载量;PBMCs中未发现总HBVDNA/cccDNA的比值=1的情况,即未找到cccDNA相对稳定状态的证据,这也许与PBMCs作为免疫细胞的集合体,参与了机体对HBV免疫作用过程的各个环节和免疫细胞更新较快有关。

摘要： 背景：骨髓间充质干细胞MSC诱导分化为神经细胞，是神经系统疾病细胞治疗的有效手段，但目前的时效尚不完善。 目的：应用神经发育音猬因子(SHH)诱导恒河猴骨髓间质下细胞(MSCs)向神经样细胞分化。设计、时间及地点：观察对比试验，于2007-02/2008-06在中山大学眼科中心国家重点实验室完成。材料：1-2周龄恒河猴12只，胫骨粗隆抽取骨髓，诱导分化为神经样细胞。 方法：密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓干细胞，倒置相差显微镜观察生长情况，MTT法测定细胞生长曲线，流式细胞仪鉴定细胞表型，免疫组化鉴定分化细胞标志，透射电镜和扫描电镜观察分化细胞超微结构。 结果：体外分离培养的恒河猴骨髓MSCs，经流式细胞仪表型鉴定，且具有较高均一性。通过SHH诱导方案诱导处理7d后，分化细胞多数表现为NSE、NF-M、Tau和Nestin染色阳性，经图像统计分析发现经SHH诱导方案神经十细胞标志物Nestin阳性率显著高于RA诱导办案(p<0.01)，另一方面经RA诱导方案诱导的细胞表现GFAP阳性率高于SHH诱导方案，二者具有显著性差异(p<0.05)。 结论：实验证实SHH诱导方案是一种诱导恒河猴MSC向神经样细胞分化的有效途径。

摘要： 本实用新型公开了一种用于密度梯度离心的离心管，包括管帽、离心管主体、母接头、公接头，所述离心管主体上端为开放式开口，且离心管主体上部外壁设有外螺纹口，外螺纹口上套有管帽，离心管主体侧壁底部开设有母接头，母接头上开设有螺纹接口，母接头上套有公接头，公接头内开设有内螺纹槽。本实用新型封闭出口方式均为螺纹，相对于其他产品更能保障形成密闭的环境，在高速离心过程中减少发生漏液情况的可能性；并且操作简单方便，无需依赖实验人员的操作熟练程度；无须热封器辅助部件，降低实验成本，降低操作难度，减少操作步骤；更易控制样品体积，增加样品回收率，减少目的产物丢失。

摘要： 本发明公开了一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法。首先将蔗糖溶于水中，配制成不同质量百分比的浓度梯度溶液，然后将待测花粉混入10%的蔗糖溶液中，注入离心管底。接着采用层铺法配制20~70%的蔗糖密度梯度离心液。在20°C下，以4000~10000rpm速度，离心5~15min，待花粉达到沉降平衡后静置，取花粉悬浮所在层相应浓度的蔗糖溶液，绘制待测花粉在该相应浓度蔗糖溶液中的吸光度标准曲线，以该曲线为参照，采用分光光度计在290nm波长下，测定花粉悬浮所在层蔗糖溶液的吸光度值，根据下列公式计算花粉密度：

摘要： 本发明公开了一种基于密度梯度离心法的甲壳类食品合格率检测装置，包括壳体，所述壳体螺纹连接有上端盖，所述壳体右侧下方固定连接有电机座，电机座上方通过螺栓固定连接有电机，电机输出端固定连接有水平转轴，壳体内底部固定连接有轴承座，所述水平转轴与轴承座转动链接，壳体内部下方固定连接有下隔板，下隔板位于水平转轴上方，所述水平转轴中部固定连接有曲拐，曲拐外侧转动连接有第一传动杆。与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明结构简单，使用方便，可以将甲壳类的食品外壳进行粉碎，同时通过离心使得外壳与肉质分离，进而获得肉质，即可检测到甲壳动物的存活率，避免出售死亡较多的食材，值得推广。

摘要： 本发明公开了一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法。首先将蔗糖溶于水中，配制成不同质量百分比的浓度梯度溶液，然后将待测花粉混入10%的蔗糖溶液中，注入离心管底。接着采用层铺法配制20~70%的蔗糖密度梯度离心液。在20°C下，以4000~10000rpm速度，离心5~15min，待花粉达到沉降平衡后静置，取花粉悬浮所在层相应浓度的蔗糖溶液，绘制待测花粉在该相应浓度蔗糖溶液中的吸光度标准曲线，以该曲线为参照，采用分光光度计在290nm波长下，测定花粉悬浮所在层蔗糖溶液的吸光度值，根据下列公式计算花粉密度：

摘要： 本发明公开了一种基于密度梯度离心法的甲壳类食品合格率检测装置，包括壳体，所述壳体螺纹连接有上端盖，所述壳体右侧下方固定连接有电机座，电机座上方通过螺栓固定连接有电机，电机输出端固定连接有水平转轴，壳体内底部固定连接有轴承座，所述水平转轴与轴承座转动链接，壳体内部下方固定连接有下隔板，下隔板位于水平转轴上方，所述水平转轴中部固定连接有曲拐，曲拐外侧转动连接有第一传动杆。与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明结构简单，使用方便，可以将甲壳类的食品外壳进行粉碎，同时通过离心使得外壳与肉质分离，进而获得肉质，即可检测到甲壳动物的存活率，避免出售死亡较多的食材，值得推广。

摘要： 本发明涉及小麦面筋蛋白分离及纯化加工技术。本发明公开了一种利用蔗糖密度梯度离心法分离小麦醇溶蛋白的方法。首先将蔗糖溶于水中，配制成不同质量百分比浓度的溶液，然后将待分离的溶于70%乙醇的醇溶蛋白溶液，注入离心管底。采用层铺法配制10~70%的蔗糖密度梯度离心液。在4°C下，以5000~20000g，离心10~60 min，待醇溶蛋白达到沉降平衡后，取相应浓度的蔗糖溶液，采用分光光度计在280 nm波长下，测定所在层蔗糖溶液的蛋白质含量，根据不同的蔗糖密度可以将醇溶蛋白分为轻质、中质和重质醇溶蛋白。本发明适用于分离纯化醇溶蛋白，结果准确，重复性好，操作简便、易行，需样品量少。

摘要： 低剂量高低密度梯度离心法洗涤人类PESA精子的方法，将80%密度梯度培养基0.5ml加入锥形管中，然后将40%密度梯度培养基0.5ml加在液面之上，使之液面分层清晰；充分混合附睾液标本，将0.5ml附睾液缓慢的加在40%密度梯度培养基液面上，使之液面分层清晰；离心400×g15min，优质精子将在锥形管底部沉淀；轻轻吸取出沉淀，悬浮于5mlHET培养基中，离心300×g8min以去除残留的密度梯度培养基；吸出沉淀，悬浮于3.0ml精子获能培养基中，离心300×g5min以去除残留的HTF培养基；去除上清液，留取0.5ml左右的获能液与沉淀充分混匀，置于37°C、5%CO2培养箱中代用。

摘要： 本发明提供一种密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法，其包括如下步骤：BMSCs的分离，BMSCs的原代培养，BMSCs的传代培养与扩增，培养细胞表面抗原检测以及生长曲线的测定。本发明采用的密度梯度离心法，用密度为1.077的淋巴细胞分离液来分离BMSCs，经过梯度离心后，将大部分红细胞、脂肪细胞、血小板等去除，获得相对较高纯度的BMSCs细胞，再根据BMSCs贴壁生长的特点，培养2-3天后可见BMSCs基本贴壁，因此在原代培养末期即可以获得均一性较好的BMSCs。本发明具有操作简单，快速实用等优点，是一种较为有效的分离纯化BMSCs的方法。

摘要： 本实用新型提供一种密度梯度离心法富集单一尺寸纳米粒子的一体化装置，其特征在于，包括水浴恒温双层U形管，所述水浴恒温双层U形管中间设置有可插拔嵌入式聚四氟乙烯隔膜，所述水浴恒温双层U形管内设置有温度计及密度计，所述温度计及密度计通过线路与用于显示液体密度值及温度的读数器连接，所述水浴恒温双层U形管右管设置有聚四氟乙烯搅拌螺旋桨，所述水浴恒温双层U形管右管底部设置有出料口，该出料口通过电子蠕动泵直接向离心机中离心管加液，所述离心机的离心管架可以自动升起，所述离心管架归回原位的同时自动锁死。本实用新型提供的密度梯度离心法富集单一尺寸纳米粒子的一体化装置，结构简单，操作方便；成本低有利于实现商业化。

摘要： 本实用新型公开了一种基于密度梯度离心法的甲壳类食品合格率检测装置，包括壳体，所述壳体螺纹连接有上端盖，所述壳体右侧下方固定连接有电机座，电机座上方通过螺栓固定连接有电机，电机输出端固定连接有水平转轴，壳体内底部固定连接有轴承座，所述水平转轴与轴承座转动连接，壳体内部下方固定连接有下隔板，下隔板位于水平转轴上方，所述水平转轴中部固定连接有曲拐，曲拐外侧转动连接有第一传动杆。与现有技术相比，本实用新型的有益效果是：本实用新型结构简单，使用方便，可以将甲壳类的食品外壳进行粉碎，同时通过离心使得外壳与肉质分离，进而获得肉质，即可检测到甲壳动物的存活率，避免出售死亡较多的食材，值得推广。