稻虾共养病虾肠道细菌群落变化与病原细菌分离及药物敏感性

摘要

病害是影响稻虾共养农民经济收入的重要因素。为明确稻虾共养发病塘口中致病菌的种类及其防治方法,以健康虾和病虾为研究材料,运用Illumina MiSeq全基因组测序技术,对健康虾和病虾肠道内细菌的群落组成进行测定和分析,预估出病原菌的种类。在此基础上,使用选择性培养基对病虾肠道内疑似病原菌进行分离。将分离所获疑似病原菌注射至健康虾体肠道内,并观察虾体死亡情况,最终确定所选病原菌菌株。通过显微观察、16S rDNA序列分析,最终确定该病原菌的分类地位。最后利用药敏性试验,筛选出对该病原菌有抑制效果的抗生素和中草药种类。试验结果表明,健康虾与病原虾肠道内的细菌群落结构具有显著性差异。在门水平上,健康虾肠道内细菌主要是柔壁菌门,其相对丰度为74.23%;而病虾肠道内细菌主要是变形菌门,其相对丰度为67.39%;在属水平上,健康虾肠道内主要是柔膜菌属,其相对丰度为48.30%;病虾肠道内主要是非保密气单胞菌属,其相对丰度为13.50%。分离结果显示,所获8株细菌均为革兰氏阴性菌,在选择性培养基上均呈黄色。病原菌回接感染结果表明,1.5×10;CFU/mL注射后1 d内,致死率高达100%。分子学鉴定结果表明,该病原菌为哈夫尼菌属蜂房哈夫尼菌。该菌对所选的卡那霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、氯霉素这5种抗生素比较敏感;对黄芩、苦参、艾叶等3种中草药水提物比较敏感。本研究可为稻虾共养流行病的诊断及防治,以及小龙虾的健康养殖提供理论依据。