正交设计优化油松 ISSR -PCR 反应体系

摘要

采用正交设计的方法对油松ISSR-PCR反应体系5因素（ Taq DNA聚合酶、Mg2＋、模板DNA、dNTPs、引物的浓度）在4水平上进行优化试验，PCR结果用SPSS数据软件分析。结果表明：各因素不同水平对PCR反应结果都有显著的影响，且除dNTP因素外其他4因素影响均较大；筛选出各反应因素的最佳水平，建立油松ISSR-PCR的最佳反应体系（20μL）为：Taq DNA聚合酶1 U、模板5μg/μL、Mg2＋2．0 mmol/L、dNTP 0．20 mmol/L、引物0．4μmol/L；进行梯度退火试验，筛选出针对不同引物的最适的油松ISSR退火温度。该优化体系的建立为油松及其近缘种的系统学和种质资源鉴定及遗传多样性的研究奠定基础。