厌氧氨氧化功能微生物PCR－DGGE分析方法优化

摘要

基于厌氧氨氧化（anaerobic ammonium oxidation，Anammox）开发的相关工艺在污水脱氮处理中具有重要作用；但Anammox微生物是一类目前尚不能分离和纯培养的微生物，分析其功能微生物的类型，对于研究其生物学机理并改良其工艺具有重要意义。本研究对变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE）在Anammox微生物应用中的分析条件进行了优化，以提高PCR－DGGE 的分析效果。结果表明，采用针对16S rDNA V3区的GC－F341／R518引物组合，PCR最佳退火温度为64℃；DGGE电泳中，最佳上样量为5～7μL，最佳胶浓度为8％，最佳电压／时间为80 V／16 h。优化后的PCR－DGGE具有准确性高和灵敏度好的特点。