荧光PCR探针熔解曲线法检测老年肺结核患者耐药性的价值

摘要

目的 评价荧光PCR探针熔解曲线法(简称"探针熔解曲线法")检测老年肺结核患者MTB临床分离株对一线抗结核药品耐药性的应用价值.方法 回顾性搜集2018年9月至2020年10月河北省胸科医院收治的159例年龄≥65岁的老年肺结核患者作为研究对象.所有患者肺结核诊断明确,具有影像学检查阳性体征、BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")培养阳性、对硝基苯甲酸(PNB)鉴别培养基生长试验初步菌种鉴定为结核分枝杆菌(MTB).采用MGIT 960药物敏感性试验(简称"药敏试验")和探针熔解曲线法检测MTB临床分离株对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素的耐药及突变情况.以MGIT 960药敏试验结果为参照标准,评价探针熔解曲线法的检测效能,并对两种药敏试验检测结果不一致的菌株进行耐药基因突变位点测序.结果 以MGIT 960药敏试验结果为标准,探针熔解曲线法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素的敏感度分别为98.31％(58/59)、96.72％(59/61)、87.50％(35/40)及81.40％(35/43);特异度分别为97.00％(97/100)、95.92％(94/98)、81.51％(97/119)及80.17％(93/116);符合率分别为97.48％(155/159)、96.23％(153/159)、83.02％(132/159)及80.50％(128/159),Kappa值分别为0.973、0.974、0.751、0.785.两种检测方法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素耐药性不一致的菌株分别有4、6、27、31株,其中,探针熔解曲线法检测为耐药的菌株分别有3、4、22、23株,且经耐药基因测序均发现耐药突变位点.结论 探针熔解曲线法可快速检测出MTB耐药突变,且敏感度高、特异度强,与MGIT 960药敏试验结果一致性良好,可作为老年肺结核患者早期制定抗结核方案的依据.