LYN通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响

摘要

目的探讨LYN对胃癌细胞迁移、侵袭等生物学行为的影响, 并分析其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法选取2017年10月—2018年5月承德医学院附属医院收治的胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织样本, 采用qRT-PCR检测在临床收集的胃癌和癌旁组织样本中的LYN表达水平。以胃癌AGS细胞为实验对象, 利用脂质体Lipofectamine2000将shRNA-LYN转染至胃癌AGS细胞中作为实验组（sh-LYN组）, 未转染细胞为对照组（NC组）。qRT-PCR检测转染前后AGS细胞中LYN mRNA表达情况。Transwell检测细胞的迁移和侵袭;TUNEL检测细胞凋亡;蛋白印迹分析（Western Blot）检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白, 对其调控机制进行研究。计量资料以均值±标准差（Mean±SD）表示, 两组间比较采用独立样本t检验。P＆0.05为差异具有统计学意义。结果 LYN mRNA表达在胃癌组织中被显著上调（t=11.04, P＆0.001）;sh-LYN转染胃癌细胞可使LYN蛋白的表达量低于正常对照组（F=961.26,P=0.016）;转染后, sh-LYN组细胞的迁移、侵袭受到抑制（t=3.437、4.450, P=0.011、0.026）, 转染后sh-LYN组细胞的凋亡率显著高于正常对照组（t=6.482, P=0.003）;Western Blot检测结果:相比于正常对照组, sh-LYN敲低LYN的表达之后, 可显著降低Wnt3和β-catenin的表达。下游蛋白的检测发现LYN敲低后, EMT上皮标记E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达增加, EMT间充质标记N-钙黏蛋白（N-cadherin）, 波形蛋白（vimentin）表达则下调, 相关蛋白锌指蛋白1（Snail1）和锌指蛋白2（Snail2）表达也下调。结论敲低LYN可抑制胃癌细胞的迁移和侵袭, 并诱导胃癌细胞凋亡, 其过程与Wnt/β-catenin信号通路有关。