宫颈癌HeLa细胞外泌体对细胞迁移和侵袭的影响及其Wnt/β-catenin信号通路机制

摘要

目的:探讨宫颈癌HeLa细胞外泌体对细胞迁移、侵袭及Wnt/β-连环蛋白(-catenin)信号通路的影响,阐明其外泌体在宫颈癌发生发展过程中的可能作用机制.方法:取对数生长期宫颈癌HeLa细胞,采用超速离心法分离宫颈癌HeLa细胞外泌体,透射电镜下观察外泌体形态表现,Western blotting法检测外泌体标志蛋白CD63和CD81的表达,鉴定分离出来的外泌体.将HeLa细胞分为外泌体组(Exo组)和对照组,2组细胞分别用含和不含HeLa细胞外泌体的培养基培养.共聚焦显微镜下观察HeLa细胞摄取外泌体情况,其中外泌体采用PKH26荧光标记,HeLa细胞用DAPI荧光进行核染色,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验测定细胞迁移能力,Western blotting法检测细胞中Wnt1、β-catenin和T细胞因子4(TCF4)蛋白表达水平.结果:透射电镜下观察,HeLa细胞中分离的外泌体为是圆形或椭圆形、直径为40～100 nm的囊泡状小体,且富含CD63和CD81蛋白.共聚焦显微镜下观察,Exo组HeLa细胞膜表面有外泌体附着,而对照组HeLa细胞膜表面无外泌体附着.Transwell小室实验,Exo组HeLa细胞中侵袭细胞数明显高于对照组(t=17.894,P＜0.01).细胞划痕实验,Exo组HeLa细胞迁移距离明显长于对照组(t=9.689,P＜0.01).Western blotting法检测,与对照组比较,Exo组HeLa细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin和TCF4蛋白表达水平均明显升高(t=13.159,P＜0.01;t=15.478,P＜0.01:t=7.734,P＜0.01).结论:宫颈癌HeLa细胞来源的外泌体可促进宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与HeLa细胞来源外泌体可促进Wnt/β-eatenin信号通路的激活及下游TCF4基因的表达有关.