EP-15A3在荧光定量PCR测定HBV-DNA精密度和正确度验证中的应用

摘要

目的 探讨美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP15-A3在荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法测定乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)精密度和正确度验证中的应用价值.方法 按照CLSI EP15-A3方案,以北京康彻思坦高 、低2个浓度水平HBV-DNA标准物质作为精密度和正确度验证样本,采用荧光定量PCR法测定HBV-DNA.每个样本重复测定5次,持续5 d,得到25个数据.Grubbs′法计算离群值,单因素方差分析用户重复性(批内不精密度,SR)、实验室内不精密度(SWL)和验证区间(V I),分别与厂家声明的批内不精密度(σR)和实验室内不精密度(σWL)进行比较,如果SR≤ σR、SWL≤ σWL,则精密度验证通过;如果测量均值(x)在V I内,则正确度验证通过.结果 荧光定量PCR法测定HBV-DNA的结果通过Grubbs′法离群值检查,无离群值.高浓度水平的SR(0.87％)≤ σR(5.00％)、SWL(1.60％)≤ σWL(5.00％);低浓度水平的SR(3.79％)≤ σR(5.00％)、SWL(4.83％)≤ σWL(5.00％);高 、低浓度水平x分别为6.54、3.15 Log IU/mL,均在V I(6.28～7.04、2.74～3.56 Log IU/mL)内.结论 运用CLSI EP15-A3验证荧光定量PCR法测定的HBV-DNA的精密度和正确度性能,高 、低2个浓度水平的SR与SWL符合厂家声明要求,测量均值在V I内,精密度和正确度验证通过.