去乙酰化酶SIRT5的原核表达及多克隆抗体的制备

摘要

目的 克隆小鼠的Sirt5基因,及制备SIRT5多克隆抗体.方法 提取小鼠肝细胞总RNA进行RT-PCR,PCR法扩增Sirt5基因,将此基因克隆至pET-28a载体,转化E.coli BL21(DE3),经异丙-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,利用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化;纯化的目的蛋白免疫Bal/c小鼠后,收获血清并鉴定.结果 成功构建了Sirt5原核表达载体,并能在宿主菌E.coli BL21(DE3)中高效表达;利用纯化的蛋白制备了理想的多克隆抗体.结论 利用分子克隆技术,获得了高纯度的SIRT5蛋白并制备了多克隆抗体,为进一步研究奠定了基础.