新城疫病毒HN基因真核细胞定位表达的重组质粒的构建

摘要

目的构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN（hemagglutinin-neuraminidase）基因。方法应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,以新城疫病毒D90株RNA为模板,分别扩增出含有HN基因全长和不含终止子的HN基因片段,将克隆的HN基因片段经双酶切后定向捅入真核表达质粒pcDNA3.1（+）中,经过定向插入组织凝血酶原激活物（tPA）的前导序列和/或A型流感病毒血凝素（HA）基因跨膜区（TM）片段进行修饰分别构建胞浆型、跨模型和分泌型DNA质粒。结果所有重组质粒经酶切和测序鉴定插入正确。经过体外转染真核细胞,间接免疫荧光和SDS-PAGE蛋白质电泳检测,证明构建的新城疫病毒HN基因定位表达于真核细胞的胞浆、胞膜和细胞外。结论成功构建了定位表达于细胞不同部位的HN蛋白的DNA质粒即胞浆型、跨模型和分泌型。