铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-LasR的构建及在大肠埃希菌中的表达效率

摘要

目的构建铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-LasR,并在大肠埃希菌中研究其表达效率。方法提取铜绿假单胞菌PA01株DNA,PCR扩增lasR基因,并将其与pGEX-1λT连接,构建重组质粒pGEX-LasR。将pGEX-LasR转入大肠埃希菌BL21（DE3）中,筛选阳性克隆,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定,然后异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹试验分析和鉴定表达产物。结果 PCR扩增出717 bp的lasR基因;双酶切和PCR显示重组质粒构建成功;SDS-PAGE发现重组BL21（DE3）可表达相对分子质量约为53 000的LasR重组蛋白,表达量约占菌体总量的21%。Western印迹试验显示,LasR重组蛋白可与铜绿假单胞菌感染的鼠血清发生特异性反应。结论本研究成功构建了lasR基因的原核表达载体pGEX-LasR,该质粒可在大肠埃希菌BL21（DE3）中高效率表达具有免疫反应性的LasR重组蛋白。