日本血吸虫尾蚴及童虫可溶性抗原蛋白质组研究

摘要

应用免疫蛋白质组研究方法筛选、鉴定日本血吸虫尾蚴、童虫可溶性抗原蛋白质。方法日本血吸虫尾蚴可溶性粗抗原(SCAP)、童虫可溶性粗抗原(SLAP)分别用双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白质，每样本同时制3块胶，1块胶进行银染，2块胶通过电转印后再分别用感染兔和正常兔血清作Western印迹分析，确定特异性阳性反应点，再从相应银染胶图上找到匹配的抗原蛋白质点；用MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定抗原蛋白质。结果SCAP、SLAP与感染兔血清免疫反应分别获得94个和68个阳性点，在相应的银染胶图上分别获得33个和31个匹配蛋白质点；用MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定和NCBI数据库检索，鉴定成功率分别为100.0％(20/20)和68.2％(15/22)。已获鉴定的SCAP抗原中蛋白酶占62.5％(10/16)，SLAP抗原中蛋白酶占36.4％(4/11);2个抗原蛋白为SCAP和SLAP共有。结论2-DE能有效地分离日本血吸虫可溶性抗原蛋白质，2-D Western印迹法能较好地筛选特异性抗原；2-D Western印迹法阳性点与2-DE胶图蛋白质点匹配率低，低丰度的抗原蛋白质易被漏检；尾蚴和童虫的抗原蛋白质组差异较大。