通过融合表达COMP48自折叠肽提高纳米抗体与CD47抗原的亲和力

摘要

目的 利用自折叠肽人软骨寡聚基质蛋白(COMP48)改造CD47纳米抗体,以提高其与CD47抗原的亲和力.方法 设计和合成COMP48与CD47纳米抗体(VHHB1)DNA的融合序列,构建重组质粒pET22b-VHHB1-COMP48,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达融合蛋白.采用蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附测定(ELISA)和非竞争ELISA法检测融合蛋白和抗原CD47的结合特异性和亲和力.结果 采用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导得到重组蛋白VHHB1-COMP48,经固定化金属离子亲和层析纯化后得到纯度为90％的重组蛋白.蛋白质印迹结果显示,重组蛋白VHHB1-COMP48可特异性结合抗原CD47,但不结合无关蛋白.间接ELISA和非竞争ELISA结果显示,偶联COMP48的纳米抗体VHHB1-COMP48与未偶联的纳米抗体VHHB1相比亲和力增加,差异具有统计学意义(P<0.01).通过非竞争ELISA测得融合COMP48的纳米抗体的结合常数为6.97×107 L/mol,解离常数为1.434×10-8 mol/L.结论 在纳米抗体后偶联COMP48可提高纳米抗体与抗原的亲和力.