体外重建组织工程人角膜内皮在新西兰兔角膜内皮移植中的应用

摘要

目的:验证体外重建组织工程人角膜内皮(TE-HCE)在角膜内皮移植中的作用.方法:以非转染人角膜内皮细胞(HCE细胞)为种子细胞,以去上皮层修饰羊膜为载体支架体外重建的TE-HCE,经CM-DiI标记后对撕除内皮层和后弹力层(DM)的新西兰兔进行了兔穿透性角膜内皮移植.用裂隙灯显微镜观察移植眼角膜的透明度.用荧光显微镜观察种子细胞荧光标记.用茜素红染色和冰冻切片HE染色和扫描电镜观察种子细胞的形态、细胞连接的形成情况、细胞单层的完整性及其与DM结合的紧密程度.用透射电镜方法鉴定种子细胞、DM和角膜的超微结构.结果:TE-HCE可使新西兰兔角膜保持透明39d以上.角膜内皮层移植区的细胞均带有CM-DiI荧光标记.绝大多数种子细胞为六角形,细胞间连接紧密,重建出了完整的角膜内皮层,且内皮层与DM结合紧密.种子细胞重建出了连续的角膜内皮层,种子细胞、DM和角膜的形态结构与正常对照眼的几乎相同.结论:移植后的TE-HCE在种子细胞形态、连续单层状态、细胞连接形成及超微结构上均与对照兔眼的角膜内皮类似,使移植新西兰兔角膜长期保持透明.