创伤早期伤口液作用真皮多能干细胞差异表达cDNA文库的构建

摘要

目的:研究创伤早期伤口液作用前后真皮多能干细胞基因表达的变化,探讨真皮多能干细胞参与创伤修复启动的分子机制.方法:取伤后1d伤口液作为创伤修复启动微环境,刺激真皮多能干细胞,24h后提取总RNA为实验方(tester),未予刺激的真皮多能干细胞总RNA为驱动方(driver).实验方、驱动方总RNA由SMART cDNA方法合成cDNA,然后用抑制消减杂交(SSH)方法获得消减杂交产物.消减杂交产物克隆到T载体构建消减文库.对部分克隆进行杂交筛选及序列比对.结果:消减杂交文库挑取615个克隆进行PCR扩增,阳性率约为97%.取其中48个克隆进行反向Northern杂交,获得5个差异表达基因.经Genebank检索,这些差异表达基因与已知序列有较高同源性,其中大多为与创伤修复相关的基因.结论:我们成功构建了创伤早期伤口液刺激前后大鼠真皮多能干细胞差异表达cDNA文库,并筛选、克隆出部分与真皮多能干细胞参与创伤修复相关的差异表达基因.