斑马鱼p53基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

摘要

利用原核表达系统克隆表达斑马鱼p53基因.RT-PCR法从斑马鱼胚胎申扩增获得p53基因编码区,并将其克隆至原核表迭载体pET28a上,构建重组质粒pET28a/z-p53,将重组质粒转化且coli BL21(DE3)受体菌,IPTG诱导表达,表达产物经镍往纯化、尿素透析复性,SDS-PAGE电泳分析,结果表明,p53基因在大肠杆菌中成功表达,表达的p53融合蛋白分子量大约为53kD,透析复性后获得了高纯度可溶性的p53蛋白.