酵母组蛋白乙酰基转移酶GCN5和去乙酰化酶RPD3在大肠杆菌中的表达

摘要

以酵母基因组DNA为模板,通过PCR方法分别扩增出在5′端带有6xHis标签的gcn5和rpd3基因,将其克隆到pBV220质粒中,分别构建成表达质粒pBVgcn5和pBVrpd3,转化大肠杆菌(Escherichia coli)并进行诱导表达.SDS-PAGE显示,含重组质粒的菌株经热诱导后分别过量表达出约50kDa的蛋白.利用6xHis亲和层析纯化了这两种重组酶.对组蛋白乙酰基转移酶GCN5进行体外活性检测,证实其具有组蛋白乙酰基转移酶活性.本工作为通过体外实验研究乙酰化和去乙酰化修饰与基因转录调控的关系奠定了基础.