红莲型水稻杂种F1花药噬菌体展示文库的构建

摘要

噬菌体展示是研究蛋白质相互作用的重要手段,为深入研究红蓬型水稻不育和育性恢复的分子机理,以红莲型水稻杂种F1花药为材料,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA,在双链cDNA末端加上定向EcoRI/HindⅢ接头,再用EcoR I和HindⅢ消化接头,形成两端分别带有EcoR Ⅰ和HindⅢ粘性末端的双链cDNA.经Mini Column纯化后,收集300 bp以上的双链cDNA片段,将其连接到带有EcoR Ⅰ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体上,经体外包装后,以BL T5403为受体菌构建了红莲水稻杂种F1花药的噬菌体展示文库.经测定显示,该噬菌体展示文库容量为1.03x106pfu/mL,重组率为100%,扩增后文库滴度为2.14×1012pfu/mL.对随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,97%的插入片段大于300 bp.