目的:探究敲低环状RNA小脑变性相关蛋白1反义转录物(Circular RNAantisense to the cerebellar degeneration related protein 1 transcript,circCDR1as)对糖皮质激素诱导的人股骨头骨微血管内皮细胞(bone microvascular endothelial cells,BMECs)活性及血管生成的影响。方法:收集糖皮质激素诱导的股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)患者股骨头组织,HE染色观察组织病理学特征,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测CircCDR1as表达变化;获取全髋关节置换术患者的无病变股骨头,分离与培养BMECs,通过流式细胞术检测细胞表面标记物CD31、CD34、CD45、CD54、CD144和CD117表达与细胞免疫荧光染色检测CD31与vWF表达来鉴定BMECs;实验分组包括对照组、GC组、shNC+GC组和shCDR1as+GC组,通过糖皮质激素氢化可的松处理细胞以及shCDR1as、shNC转染细胞进行对应处理,qRT-PCR检测CircCDR1as表达变化,MTT法和EdU染色检测细胞增殖水平,体外成管实验观察细胞管腔形成情况,Western blot测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与血管内皮细胞因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)的蛋白表达。结果:ONFH患者股骨头组织内骨髓坏死并有空骨腔出现,CircCDR1as相对表达量显著高于对照组(P<0.05);观察到分离的细胞生长状态良好,CD31、CD54和CD144均呈阳性表达,CD34、CD45和CD117均呈阴性表达,细胞内CD31与vWF的免疫荧光表达明显,由此说明成功分离到BMECs;与对照组比较,GC组CircCDR1as相对表达量上调,细胞增殖活性下降,EdU阳性细胞率降低,细胞形成的管腔数目减少,VEGF与VEGFR-2蛋白相对表达量下调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与shNC+GC组比较,shCDR1as+GC组CircCDR1as相对表达量下调,细胞增殖活性与EdU阳性细胞率均升高,细胞形成的管腔数目增加,同时,VEGF与VEGFR-2蛋白相对表达量上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:患者股骨头坏死组织内CircCDR1as高表达,敲低CircCDR1as能够在体外抑制糖皮质激素诱导的BMECs活性下降,促进血管生成,从而对BMECs起到保护作用。
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