构建原代分离培养与鉴定小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的方法及模型

摘要

目的:构建能够对小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、原代培养与鉴定的方法 ,从而对建立稳定高效的细胞膜性起到积极的促进作用.方法:(1)使用低浓度胰酶联合Ⅰ型胶原酶消化法,对小鼠的肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离;(2)经差速离心差速贴壁和免疫黏附法对Ⅱ型上皮细胞进行纯化及原代培养.并倒置显微镜对细胞形态及生长状况进行观察,测定肺泡Ⅱ型上皮细胞的产量、活力以及纯度.对肺泡表面活性蛋白A和C的表达进行免疫细胞化学染色鉴定,使用透射电镜对肺泡Ⅱ型上皮细胞的特异性细胞结构进行鉴定.结果:每只小鼠所获得的肺泡Ⅱ型上皮细胞数量为6(4.8±1.2)×10,纯度为(85.0±2.4)%,细胞活力为(92.0±2.4)%.且原代肺泡Ⅱ型上皮细胞在对倒置显微镜下为立方形或圆形,细胞质内存在许多差别非常明显的细小颗粒,生长方式为岛状;在免疫细胞化学鉴定方面,肺泡表面的活性蛋白A为棕黄色,C为绿色,二者都定位表达于细胞浆;透射电镜可见特征性板层小体及细胞游离面大量微绒毛.结论:胰酶联合胶原酶消化,差速离心差速贴壁和免疫黏附纯化法能够获得产量和纯度都具有优势的AECⅡ,符合一般的体外实验的要求.