miR-369-3p对缺氧诱导海马神经元细胞增殖、凋亡的影响及其机制

摘要

目的 探讨miR-369-3p对缺氧诱导的海马神经元细胞(Hhn)增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 将Hhn细胞置于持续充入95％N2+5％CO2的密闭培养箱中进行缺氧处理48 h(缺氧组),正常培养的细胞作为对照组.将miR-NC、miR-369-3p、anti-miR-NC、anti-miR-369-3p转染至Hhn细胞中,分别记为miR-NC组、miR-369-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-369-3p组;将anti-miR-NC、anti-miR-369-3p、pcDNA3.1、pcDNA3.1-NAMPT分别转染至Hhn细胞中再进行缺氧处理,分别记为缺氧+anti-miR-NC组 、缺氧+anti-miR-369-3p组 、缺氧+pcDNA3.1组 、缺氧+pcDNA3.1-NAMPT组;将anti-miR-369-3p质粒分别与si-NC、si-NAMPT共转染至Hhn细胞中再进行缺氧处理,分别记为缺氧+anti-miR-369-3p+si-NC组、缺氧+anti-miR-369-3p+si-NAMPT组;转染均采用脂质体法.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-369-3p表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测SOD活性和MDA含量;双荧光素酶报告基因检测miR-369-3p和NAMPT的靶向关系.结果 与对照组比较,缺氧组Hhn细胞中miR-369-3p表达水平升高,NAMPT表达水平降低,P21、Bax表达水平升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平降低,细胞活性降低,细胞凋亡率升高,SOD活性降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与缺氧+anti-miR-NC组比较,缺氧+anti-miR-369-3p组miR-369-3p表达水平降低,P21、Bax表达水平降低,Cyclin D1、Bcl-2表达水平升高,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,SOD活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-NAMPT组NAMPT表达水平升高,P21、Bax表达水平降低,Cyclin D1、Bcl-2表达水平升高,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,SOD活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与缺氧+anti-miR-369-3p+si-NC组比较,缺氧+anti-miR-369-3p+si-NAMPT组P21、Bax表达水平升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平降低,细胞活性降低,细胞凋亡率升高,SOD活性降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 抑制miR-369-3p表达可促进缺氧诱导的海马神经元细胞增殖,抑制细胞凋亡,减轻氧化应激反应,保护缺氧诱导的海马神经元细胞损伤,其机制可能与NAMPT相关,可为阿尔兹海默症的防治提供新思路和新靶点.