大肠杆菌嗜盐α-淀粉酶基因的分子改造及其酶学特性

摘要

[目的]对大肠杆菌Escherichia coli嗜盐α-淀粉酶基因进行改造,并探索嗜盐a-淀粉酶的嗜盐特性.[方法]从非嗜盐的大肠杆菌JMl09中克隆到一个嗜盐α-淀粉酶基因k6并进行重组表达.通过同源建模,确定Na+结合位点上的氨基酸残基,并对相应位点进行定点突变.最后对突变酶的酶学性质进行研究.[结果]相对于野生酶,突变酶更加嗜盐,其最适NaC1浓度由2 mol/L增加到3 mol/L,最适pH值为7,最适温度为50℃,酶活力为4 831 U/mg,提高近4倍.经HPLC检测,突变酶与2％(W/V)可溶性淀粉反应后的产物为葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖的混合物.[结论]嗜盐α-淀粉酶基因k6的嗜盐特性与Na+结合位点具有直接联系.