粉尘螨变应原第2组分血清特异性IgE酶联免疫吸附测定法的建立及其检测效能的评价

摘要

目的 建立粉尘螨变应原第2组分(Der f2)血清特异性IgE的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并评价其检测效能.方法 利用重组表达的Der f2作为包被抗原,分别建立检测Der f2血清特异性IgE的间接ELISA法和亲和素-生物素复合(ABC)-ELISA法,采用正交试验筛选两种方法的最优检测条件.分别采用上述两种ELISA法检测Der f2特异性IgE阳性标准血清,绘制两种ELISA法检测Der f2特异性IgE的标准曲线;同时以Pharmacia UniCap系统检测结果为金标准,计算两种ELISA法检测46例哮喘患者血清Derf2特异性IgE的结果符合率.结果 间接ELISA法检测Derf2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为10 μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人lgE抗体稀释倍数为1∶1 000.ABC-ELISA法检测Der f2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为15 μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,生物素标记抗人lgE抗体稀释倍数为1∶1000,HRP标记的链霉和素稀释倍数为1∶2000.间接ELISA和ABC-ELISA法的灵敏度值分别为0.72 U/ml和0.69 U/ml.间接ELISA和ABC-ELISA检测哮喘患者的符合率分别为93.5％和95.7％.结论 成功建立基于重组表达Der f2的ELISA法,其对Der f2特异性IgE具有较好的检测效能.