基于黏蛋白1的非小细胞肺癌基因疫苗的构建及免疫原性评价

摘要

目的 构建基于黏蛋白1 (MUC1)的非小细胞肺癌基因疫苗,并对其免疫原性进行评价.方法 利用弗林蛋白酶(furin)/2A序列将MUC1基因与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因进行连接,克隆入真核表达载体pVAX1,构建基因疫苗pVAX1-MUC1-F2A-GM-CSF.对基因疫苗进行鉴定后将该疫苗体外转染COS7细胞,利用流式细胞术和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别对MUC1、GM-CSF的表达情况进行检测.将32只Balb/c小鼠分为空白对照组、空质粒pVAX1组、pVAX1-MUC1组和pVAX1-MUC1-F2A-GM-CSF组,每组8只.除空白对照组外,其余实验组每只小鼠肌肉注射相应质粒100 μg,并进行电穿孔刺激,末次免疫后14 d采用ELISA和酶联免疫斑点法分别检测其诱导的体液免疫和细胞免疫反应.结果 成功克隆并构建了非小细胞肺癌基因疫苗pVAX1-MUC1-F2A-GM-CSF,流式细胞检测结果显示MUC1在COS7细胞中的阳性表达率为10％,ELISA检测结果显示pVAX1-MUC1-F2A-GM-CSF组GM-CSF表达水平高于空载体pVAX1组(P＜0.05).将疫苗免疫接种小鼠模型后,pVAX1-MUC1-F2A-GM-CSF组诱导的MUC1抗体水平高于pVAX1-MUC1组(P＜0.05),pVAX1-MUC1-F2A-GM-CSF组的小鼠脾细胞分泌干扰素-γ的斑点数多于pVAX1-MUC1组(P＜0.05).结论 pVAX1-MUC1-F2A-GM-CSF能够同时诱导较高的体液免疫和细胞免疫反应.