五种蚕沙堆肥微生物总DNA提取方法的对比研究

摘要

采用5种方法提取蚕沙堆肥中微生物总DNA，测定粗提液的吸光值，进一步利用通用引物对细菌16 S rDNA 基因V4可变区和真菌ITS区进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳分析，最后对不同方法的提取效果进行综合比较。结果表明，只有Magen D3142-02试剂盒法和SDS-高盐缓冲液法成功提取了蚕沙总DNA，得率分别为26.5和11.0μg/g FW，A260/A280值分别为1.711和1.652，A260/A230值分别为1.568和2.239。琼脂糖凝胶电泳检测显示，从两种方法提取的DNA中均扩增出了细菌16 S rDNA基因V4可变区和真菌ITS区特异片段，片段长度符合预期大小（≈300 bp）。说明两种方法均适用于蚕沙微生物总DNA的提取，前者抽提的DNA在得率和速率上具有明显优势，不足之处是价格偏贵；后者抽提的DNA纯度稍高，成本低廉，但操作非常繁琐，适用于大规模样本的提取。本研究为后续蚕沙堆肥微生物分子生物学研究提供了理论和技术参考。