多重荧光PCR检测水产品致病菌方法的建立与应用研究

摘要

根据沙门氏菌invA基因、副溶血性弧菌toxR基因和大肠杆菌O157：H7 RFBE基因的保守序列，设计引物和探针，通过优化反应体系，测定其灵敏度和特异性，建立了可同时检测上述三种致病菌的多重实时荧光PCR方法。该方法对纯茵的检测灵敏度均低于1O cfu／PCR反应体系。人工染菌样品经6h增菌，检测的灵敏度可低于10cfu／25g；对48株标准／参考菌株的检测结果，只有目的菌株呈阳性反应；而定量检测批内和批间的变异系数均小于2％。应用本法检测人工染菌样品和进出口水产品样品，结果与sN标准方法检测结果一致。%A multiplex real-time PCR method was developed for the simultaneous detection of Salmonella spp, Vibrio parahaemolytichus and Escherichia Coli O157：H7 based on the primers and probes designed based on the conserved domains of invA gene for Salmonella spp,