蜂毒素与死亡素杂合肽在毕赤酵母中的融合表达及其生物活性研究

摘要

为获得新型抗菌肽饲料添加剂,设计将蜂毒素的5-12(VLKVLTTG)氨基酸和死亡素的4-21 (KPVPIIYCNRRT-GKCQRM)氨基酸拼接成蜂毒素与死亡素杂合肽(MT,Melittin-thanatin),并通过基因工程在酵母中进行重组表达.全基因合成MT-麦芽糖结合蛋白(MBP,Maltose binding protein)DNA序列,使用EcoRI和XbaI对MT-BMP基因序列和表达载体pGAPZaA进行酶切和连接,成功构建pGAPZα A-MBP-MT毕赤酵母特异表达载体.使用AvrⅡ酶切表达载体并使其线性化,电转入GS115感受态中并筛选出阳性酵母克隆.阳性酵母克隆在YPD培养基中诱导分泌重组蛋白,通过亲和层析柱和纯化系统进行纯化,获得了48 kD左右的重组MT蛋白,纯化的MT蛋白对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有明显的抑制作用.综上,本研究获得了具有生物活性的蜂毒素-死亡素杂合肽,下一步拟开展该杂合肽的饲料添加剂相关功能研究.