RT-LAMP及RT-PCR方法快速检测玉米褪绿斑驳病毒的比较与应用

摘要

利用玉米褪绿斑驳病毒外壳蛋白基因为靶标序列设计引物,通过优化反应温度、引物浓度、反应时间以及评价环引物效果,建立了检测玉米褪绿斑驳病毒反转录环介导等温扩增 (RT-LAMP) 方法,并与RT-PCR方法比较.结果表明,RT-LAMP在64℃等温条件下反应45 min,最低可检测到280 fg的目的片段,灵敏度是RT-PCR的100倍.以甘蔗花叶病毒、玉米矮花叶病毒、小麦线条花叶病毒、玉米白线花叶病毒及玉米褪绿斑驳病毒等5种病毒为检测对象,证明该方法针对玉米褪绿斑驳病毒具有很强的特异性.利用RT-LAMP方法对100份模拟病毒感染的玉米种子进行检测,病毒检出率为100%.