Rb2/p130寡核苷酸基因芯片的制备及肺癌手术标本的检测

摘要

目的:用基因芯片方法检测肺癌标本中Rb2/p130基因的点突变情况,为肺癌诊断探索快速、准确的基因检测途径.方法:收集肺癌患者的手术标本,提取基因组DNA,检索Rb2/p130基因的DNA序列后,设计并合成探针和引物序列,将探针按一定顺序点样于醛基化玻片,制备成基因芯片.用荧光标记引物对肺癌标本DNA进行PCR扩增,扩增产物与基因芯片杂交,通过对杂交信号的检测判断是否发生热点突变,并用测序方法对突变位点进行验证.结果:在30例用寡核苷酸基因芯片的方法检测的肺癌标本中,Rb2/p 130基因突变的检出率为16.67％,其中肺腺癌的突变率为20％( 4/20),肺鳞癌的突变率16.67％(1/6);在检测过程中发现PCR产物浓度和杂交温度是影响结果的关键因素,对突变位点的测序证实了基因芯片的结果.结论:基因芯片法检测出中国人肺癌组织标本存在Rb2/p130基因突变,但突变率(16.67％)低于西方人(78.5％).未能检测全部突变位点、标本量小和人种差异可能是低突变率的原因.