荷花NnWRKY22基因的克隆与表达分析

摘要

【目的】克隆荷花(Nelumbo nucifera)NnWRKY22基因,分析该基因在荷花根、茎、叶、花中的表达模式及不同天数铜胁迫处理下的表达情况,为进一步研究该基因功能和荷花抗铜胁迫机制奠定基础。【方法】采用RTPCR方法从荷花cDNA中克隆得到NnWRKY22基因,利用Prot Param等工具对NnWRKY22氨基酸序列进行分析,利用qRT-PCR方法分析Nn WRKY22组织表达特异性以及在铜胁迫下表达量的变化。【结果】成功克隆得到荷花NnWRKY22基因,该基因ORF全长573 bp,编码190个氨基酸,含有1个保守的WRKY结构域。该蛋白理论分子量、等电点、不稳定系数和亲水性指数分别为:21.33 kDa、9.03、71.93和-0.692,属于不稳定的亲水性蛋白。进化树分析表明荷花与洛矶山耧斗菜(Aquilegia coerulea)和博落回(Macleaya cordata)亲缘关系较近。qPCR结果表明,NnWRKY22在荷花的根、茎、叶、花中均有表达,但具有组织表达特异性,在根中表达量最高,花中表达量最低。NnWRKY22基因在铜胁迫下表达增强,胁迫7 d表达量达到最高值。【结论】克隆了荷花NnWRKY22基因,该基因在荷花中特异性表达,在根中表达量最高。NnWRKY22在铜胁迫下表达增强,推测该基因在荷花抗铜胁迫中发挥重要作用。