四川省马铃薯孢囊线虫的形态和分子鉴定

摘要

【目的】四川省越西县马铃薯发现疑似线虫侵染症状,为查清病原,对分离获得的线虫进行形态学和分子生物学鉴定。【方法】采集马铃薯根系和根围土壤,对根系内部线虫进行染色观察,用简易漂浮法分离孢囊,并对发现的二龄幼虫、雌虫和孢囊进行显微摄影和形态学测计。提取孢囊和二龄幼虫的DNA,用种特异PCR方法进行鉴定,同时PCR扩增后获得核糖体rDNA部分18S基因、28S基因D2~D3区和ITS区DNA序列,在GenBank中下载已登录的各近似种(球孢囊线虫属)的部分序列,进行序列比对,并使用MrBayes 3.2.3软件进行贝叶斯法系统进化树的构建。【结果】该种线虫能入侵寄主根系内部,二龄幼虫口针基部球近圆形,向后倾斜;口针平均长<23μm;孢囊Granek比值≥3,与马铃薯金线虫高度一致。特异PCR扩增3个孢囊和4条二龄幼虫均得到了430 bp左右的明亮条带,进一步测序后得到的序列长度均为434 bp,与马铃薯金线虫一致。核糖体rDNA 18S和28S进化分析表明,该四川越西马铃薯上发现的孢囊线虫属于球孢囊属线虫,核糖体ITS基因序列进一步分析证实该群体确为马铃薯金线虫。【结论】四川省越西县马铃薯根系分离获得的线虫为马铃薯金线虫,该线虫为我国内检和外检均十分关注的检疫性线虫,一旦传入和定殖扩散,根除十分困难。建议尽快建立马铃薯金线虫疫情监测体系,加强马铃薯种薯的检疫监督管理,增加马铃薯金线虫防控技术的研发投入、研发检测和防控技术,为我国马铃薯主粮化产业健康可持续发展保驾护航。