响应面法优化余甘子种质资源ISSR反应体系

摘要

[目的]优化余甘子种质资源ISSR-PCR反应体系,为余甘子种质资源遗传多样性及亲缘关系研究提供基础.[方法]以缅甸、印度、广东、云南、福建等5份来源不同的余甘子种质资源的基因组DNA组成混合的DNA模板,综合单因素试验和响应面分析法,分析引物浓度、2×Taq Master Mix添加量、DNA模板量、退火温度等反应条件对ISSR-PCR反应体系的影响,优化建立余甘子ISSR-PCR反应体系.[结果]引物浓度和2×Taq Master Mix添加量对扩增效果有较大影响,DNA模板量影响较小;引物浓度和DNA模板量交互作用明显;余甘子ISSR反应体系为引物浓度0.4μmol·L?1,2×Taq Master Mix添加量13μL,DNA模板量30 ng,扩增结果与响应面分析模型理论值相对误差仅为9.39％;退火温度为50.5～52.7°C时,随着温度的升高,条带质量变好,数量变多,退火温度为52.7°C时可获得多样性好的清晰条带.[结论]获得ISSR-PCR反应体系为引物浓度0.4μmol·L?1,2×Taq Master Mix添加量13μL,DNA模板量30 ng,退火温度52.7°C,扩增循环数35循环,扩增获得的条带清晰、稳定,多样性好,该体系适于余甘子种质资源的遗传多样性和亲缘关系等分析研究.