山羊地方性鼻内肿瘤病毒SU蛋白的表达及其多克隆抗体的制备和特性分析

摘要

[目的] 明确山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)SU蛋白的功能.[方法] 采用RT-PCR方法从ENTV-2FJ分离株中扩增获得SU基因片段,将其克隆到Pmd-19T载体;测序验证后,再亚克隆到PET-32a(+)上,在RosettagamiB(DE3) 感受态细胞进行表达,采用SDS-PAGE 、Western-blot和ELISA对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析.[结果] 结果显示,表达的重组菌融合蛋白大小约64.38 Kd,在IPTG终浓度0.4 mmol·L-1、37 °C诱导4 h表达效果最好.用纯化的ENTV-2进行SDS-PAGE,SU重组蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体作为一抗,进行Western-blot,结果显示鼠抗SU蛋白多克隆抗体能与ENTV-2抗原进行特异性的反应.[结论] 表达的SU蛋白有较好的抗原性,为制备ENTV-2特异性单克隆抗体及建立ENTV-2特异性血清学方法奠定了基础.