葡萄球菌肠毒素B突变体的构建

摘要

目的应用重组和克隆技术在大肠杆菌中表达葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体。方法利用PCR和PCR致变技术从产SEB的标准株扩增SEB基因，与原核表达载体pTrc99A重组后引入大肠杆菌JM109。通过序列测定鉴定突变基因；用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和单向免疫扩散试验分别检测表达产物和表达量。结果获得了3株重组菌NJM109、M23JM109、M150JM109。测序表明，SEB-N序列与已报道的天然seb完全一致；SEB-M23第23位天冬酰胺密码子AAT发生定向突变，即由丝氨酸密码子AGT替代(N23S)；SEB-M150第150位氨基酸发生非定向突变，由苏氨酸密码子ACT突变为丙氨酸密码子GCT(T150A)。表达SEB-M150和SEB-M23的重组细菌裂解液经SDS-PAGE，在28000处可见有表达条带，非重组菌则无。单向免疫扩散试验和蛋白浓度测定表明，重组菌表达目的蛋白量为5μg/ml培养液，表达量占菌体总蛋白量的3.5%。结论获得了2株能表达SEB突变体的工程菌，为进一步作功能研究奠定了基础。