p27kip1过表达对肝细胞癌细胞株细胞周期的影响

摘要

目的 探讨肿瘤抑制基因p27kip1编码的P27蛋白过表达与HCC细胞株细胞周期的关系.方法 本研究从野生型p27kip1基因真核表达质粒pEYFP-P27(WT)出发,采用定点诱变技术构建了突变型p27kip1基因表达载体pEYFP-P27(S10A)、pEYFP-P27(T157A)和pEYFP-P27(T187A),然后用脂质体法将上述质粒转染HCC细胞株HepG2和Hep3B,Western Blotting检测内源和转入的P27蛋白表达,流式细胞仪检测P27蛋白过表达对HCC细胞株细胞周期的影响.结果 野生型和3种突变型的P27融合蛋白在HepG2和Hep3B中的过表达都能增强G0/G1期阻抑;同时,对HepG2细胞,核定位位点突变体P27(T157A)比野生型P27蛋白及其他两个突变体具有更强的细胞周期阻抑活性,而对Hep3B细胞,3个突变体和野生型p27蛋白对细胞周期的影响无明显差异.结论 P27蛋白过表达能够显著增强HCC细胞株的G0/G1期阻抑.