液相色谱-串联质谱法分析血液中的孕激素类药物

摘要

目的动物源食品的激素残留问题已成为当前食品安全的热点问题之一。受经济利益的驱使,个别养殖户在水产养殖中会有意添加孕激素(属于违禁性激素)类药物来刺激鱼虾等快速生长。非法使用孕激素类物质不仅关系到食品安全,而且在治安、刑事等案件中也频繁涉及。本文旨在建立血液中此类物质的液相色谱-串联质谱分析方法,以服务于相关案件的侦破。方法建立液相色谱和质谱的基本条件。色谱条件:色谱柱Hypersil Gold(50mm×2.1mm,1.9μm);进样量2μL;流动相A为甲醇,流动相B为5mmol/L乙酸铵-0.1%体积分数甲酸水溶液。质谱条件为离子源:电喷雾(ESI);气帘气(CUR):35 psi;雾化气(GS1):55psi;辅助加热气(GS2):55 psi;喷雾电压(IS):+5500 V;加热头温度(Temp.):550℃;气体均为N2。MRM模式选取离子对为炔诺酮:299.1/109.1,299.1/231.2;左炔诺孕酮:313.2/245.2,313.2/295.2;醋酸氯地孕酮:405.1/309.2,405.1/345.1;米非司酮:430.2/372.3,430.2/288.1。通过优化流动相组成、不同化合物的去簇电压(DP)和不同特征碎片离子的碰撞能(CE)确立最优联用条件及方法。在此基础上,利用保留时间、特征碎片离子及其丰度比进行定性分析,通过外标工作曲线法进行定量分析,分别得到检出限、线性范围、相关系数、日内和日间精密度、回收率等参数数据。结果液相色谱有机相与水相组成对分析物的峰形和信号强度均有较大影响。炔诺酮、左炔诺孕酮、醋酸氯地孕酮在甲醇条件下信号明显增强,虽然米非司酮无论用甲醇或乙腈作有机相其信号都无明显变化。目标分析物在利用5mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸作为水相时,较之它们单独使用,信号均有大幅增强。综合考虑各药物分析情况,确定甲醇和5 mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸为最佳洗脱溶剂。通过优化DP、CE等质谱条件,炔诺酮、左炔诺孕酮、醋酸氯地孕酮及米非司酮在正离子模式下均可得到良好检测,血液检出限在0.1~1.0ng/mL之间;通过系列血样测定,得到左炔诺孕酮、米非司酮的工作曲线线性范围均为1~500ng/mL,炔诺酮、醋酸氯地孕酮的线性范围分别为5~500ng/mL、0.5~500ng/mL,相关系数均大于0.999;高、中、低浓度条件下,血液中回收率在84.4%~97.0%之间,无明显基质效应;分析物在一天内六次重复测定所得峰面积的相对标准偏差均小于4.0%,不同天重复测定的相对标准偏差均小于6.9%。结论利用液相色谱-串联质谱技术建立了血液中孕激素类物质的定性识别和定量分析方法。该方法简便、快速、灵敏度高,可服务于刑事、治安及食品安全案件的检验。