亲和层析法提纯人尿中集落利激因子（HU—CSF）

摘要

评价用鼠巨噬细胞集落刺激因子(CSF-1)免疫的兔抗血清与人尿CSF-1的交叉反应性。一种交叉反应的抗血清用来提纯人尿中的CSF。将来自正常兔血清的IgG组分和抗CSF血清分别结合到溴化氰活化的琼脂糖凝胶上。取10升人尿用超滤法浓缩后,按顺序通过正常IgG柱和抗血清IgG柱。交叉反应蛋白质通过IgG柱去除,而CSF被抗CSF柱吸附。彻底冲洗抗体柱后,以4 mol硫氰酸钠洗脱CSF。根据在十二烷基硫酸钠(SDS)-丙烯酰胺凝胶上的迁移来判断,这一组分地含有4～5种污染的蛋白质。在进一步的提纯步骤中,CSF被刀豆素A(ConA)琼脂糖选择性地保留,然后用α-甲基葡萄糖苷洗脱。经这种方法提纯的CSF比活性为0.8～2.4×10~7U/mg蛋白质。一种单一的主要污染物质通过反相高效液相色谱(HPLC)法去除。最终提纯的CSF比活性为2.5～4.4×10~7U/mg蛋白质。每10升尿液可产生18～20μg的纯物质,收率为15%～25%。这一技术与以往报道的长时间、多步骤的方法相比,具有提纯速度快,CSF-1纯品产量高的优点。