鸭肝谷氨酸脱氢酶的纯化与酶学性质研究

摘要

目的:获得鸭肝谷氨酸脱氢酶纯品并对其酶学性质进行研究.方法:采用丙酮脱脂、重金属离子沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶层析方法,分离纯性鸭肝谷氨酸脱氢酶,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶相对分子质量测定.结果:从鸭肝中分离纯化获得电泳纯的谷氨酸脱氢酶,纯化倍数为60.93倍,酶活力回收率为11.02%,比活力达24.37U/mg.酶相对分子质量为371.41,亚基相对分子质量为61.60.推测该酶由6个相同亚基构成.该酶对NADH的Km为53.19μmol/L,最适pH值为10.0,最适反应温度为35℃.该酶在pH8.0左右较稳定;在40℃以下酶活力保持稳定.Zn2+、Li+和Cu2+对该酶具有显著的抑制作用.结论:分离纯化获得谷氨酸脱氢酶,该酶具有较高应用价值.