玉米半胱氨酸蛋白酶的真核表达及酶学性质表征

摘要

玉米半胱氨酸蛋白酶是一种重要的蛋白水解酶,作为C1家族蛋白酶的一员,可在食品、医药等领域广泛应用.本研究从玉米幼苗中提取总RNA,反转录扩增得到玉米半胱氨酸蛋白酶基因,进而构建重组真核表达载体pPICZα-zmCP1,转化毕赤酵母GS115构建重组菌.对表达的玉米半胱氨酸蛋白酶进行酶学性质研究,结果表明该酶最适反应温度为55℃,最适反应pH值为6.0,具有较好的热稳定性和有机溶剂抗性,但是pH值的稳定性、金属离子耐受性表现一般.底物特异性研究发现,该酶对小分子底物具有较强的水解能力,且偏爱P1位点为精氨酸的底物.