直接竞争化学发光酶免疫法检测呋喃妥因代谢物

摘要

建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法.采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度,通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间,建立直接竞争抑制曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价.结果表明,经优化,最佳反应条件为抗体稀释度1:4 000,酶标抗原稀释度1∶80,包被条件为37℃2h后4℃过夜,封闭液为1％牛血清白蛋白,竞争反应1h.该方法的线性检测范围为0.030～10.595 ng/mL,IC50为0.559 ng/mL;加标回收率为84.9％～103.4％,批内变异系数为3.4％～7.8％,批间变异系数为4.7％～11.8％;除与呋喃妥因原药交叉反应率为36.2％,与其他结构类似物及衍生化试剂交叉反应率均小于0.1％.该方法灵敏、准确,可用于动物组织中呋喃妥因代谢物的快速筛查.