重组羧肽酶B及其包涵体溶解性的研究

摘要

目的 构建重组羧肽酶B（rCPB）的表达质粒和表达菌株，表达羧肽酶B（CPB），并对表达CPB包涵体的溶解性进行研究。方法构建CPB重组质粒pET-21a—CPB，将其导入表达菌株BL21（DE3）中，分别在25℃和37℃进行诱导表达；所得包涵体分别用不同浓度尿素添加不同还原剂溶解，以溶液中的蛋白质浓度判定其溶解性，利用非还原SDS—PAGE分析其溶解性提高的原因。结果诱导后生长温度不同对rCPB包涵体的纯度及后期处理均有影响；rCPB包涵体在10mol／L尿素溶液中的溶解度比在8mol／L尿素溶液中提高2-3倍；添加0．75％β-巯基乙醇能显著改善rCPB包涵体的溶解效果。经非还原SDS—PAGE分析，添加β-巯基乙醇后，溶解rCPB聚体的含量减少。结论成功地表达了rCPB，并通过实验提高了rCPB包涵体的溶解度。