全神经球贴壁培养法体外长期扩增视网膜前体细胞

摘要

目的:探寻一种既高效又能连续体外扩增视网膜前体细胞(Retinal Progenitor Cell,RPC)的培养方法.方法:小鼠胚胎视网膜细胞采取神经球贴壁培养或直接贴壁培养法.神经球贴壁培养时,先经悬浮培养生成富含前体细胞的神经球,然后将低速离心分离出的神经球接种到Poly-D-Lysine包被的培养瓶,在前体细胞培养液中(含FGF-2、EGF和LIF)贴壁培养,头24 h在培养液中添加10%的胎牛血清.直接贴壁培养法是将细胞悬液直接接种到预先包被Poly-D-Lysine的培养瓶.免疫组化和FACS分析神经球贴壁培养细胞的干细胞特性和分化能力,并与直接贴壁培养法得到的细胞进行比较.结果:神经球接种到预先包被Poly-D-Lysine的培养瓶后贴附到培养瓶底,逐渐形成贴壁生长的单层细胞.该法能够在体外长期扩增视网膜前体细胞,3个月内细胞能够传代10次以上.在RA诱导分化时,能够生成成熟视网膜细胞,表达视网膜细胞特异性标记.FACS分析和免疫组化染色显示神经球贴壁培养所得细胞在未分化时Nestin阳性率(92%)细胞率以及分化为成熟视网膜细胞的比率(53.7%),均高于直接贴壁培养法获得的细胞.结论:神经球贴壁培养法能够在体外长期大量扩增视网膜前体细胞,能较好地保持干细胞特性,并容易分化为成熟的视网膜细胞,较直接贴壁培养具有较大的优越性.眼科学报2006;22:92-97.