丙泊酚通过miR-802/PTCH1/SHH通路抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭的研究

摘要

目的:探讨丙泊酚通过miR-802/PTCH1/SHH通路对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:使用不同浓度丙泊酚处理人宫颈癌细胞HeLa为丙泊酚组,使用二甲基亚砜处理细胞为对照组。采用噻唑蓝实验和Transwell实验分别检测HeLa细胞活力、侵袭和迁移能力;通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-802和PTCH1 mRNA的表达水平。通过生物信息学分析以及双荧光素酶报告基因系统验证了miR-802和PTCH1之间的靶关系。分别将NC mimic、miR-802 mimic转染至HeLa细胞中,命名为NC mimic组、miR-802 mimic组。将NC inhibitor、miR-802 inhibitor、Vector和pcDNA-PTCH1转染至10μg/mL丙泊酚处理的HeLa细胞中,分别命名为丙泊酚+NC inhibitor组、丙泊酚+miR-802 inhibitor组、丙泊酚+Vector组和丙泊酚+pcDNA-PTCH1组,检测细胞活力、侵袭和迁移能力。采用蛋白质印迹法检测PTCH1和Gli1蛋白表达水平。结果:与对照组比较,丙泊酚组HeLa细胞活力、侵袭和迁移能力均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NC mimic组比较,miR-802 mimic组HeLa细胞中的miR-802表达水平显著升高,细胞活力降低,侵袭和迁移能力降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,丙泊酚+NC inhibitor组HeLa细胞中miR-802表达水平显著升高;与丙泊酚+NC inhibitor组比较,丙泊酚+miR-802 inhibitor组HeLa细胞中miR-802表达水平显著降低,细胞活力显著增强,侵袭和迁移能力显著增强,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。PTCH1被鉴定为miR-802的靶基因。与NC inhibitor组比较,miR-802 inhibitor组细胞中PTCH1 mRNA和蛋白水平显著升高,Gli1蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达PTCH1逆转了miR-802和丙泊酚诱导的对HeLa细胞活力、迁移和侵袭能力的抑制。结论:丙泊酚通过调节miR-802/PTCH1/SHH通路来抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭。