微RNA-145抑制剂靶向CRKL调节促分裂原活化的蛋白激酶通路对卵巢颗粒细胞激素合成的影响

摘要

cqvip:目的:研究微RNA(microRNA,miRNA)-145在卵巢早衰中的作用,并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法:采用miRNA芯片预测并筛选在不同日龄雌鼠中差异性表达的miRNA,采用TargetScan预测miRNA靶基因,通过DAVID数据库对靶基因进行信号通路及生物学功能的富集分析,筛选在不同时期卵巢颗粒细胞中发挥重要调控作用的miRNA;采用MTT法检测卵巢颗粒细胞中miRNA-145抑制后生存率;采用Q-PCR检测miRNA-145及CRKL mRNA的表达水平;采用酶联免疫吸附法检测CRKL、雌二醇、卵泡刺激素、黄体生成素、p-p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及p-ERK1/2水平。结果:miRNA芯片预测差异性表达miRNA 23个,靶基因多与细胞增殖、分化有关,且多集中于MAPK通路;综合结合生物信息预测结果,筛选出与CRKL能够靶向结合的miRNA-145;miRNA-145与CRKL在颗粒细胞中变化水平呈正相关,miRNA-145在卵巢细胞中被抑制后,CRKL水平、颗粒细胞凋亡及MAPK通路的激活均受抑制,但激素分泌趋于正向调节。结论:miRNA-145抑制剂能够作用于MAPK通路抑制卵巢颗粒细胞的凋亡,调节激素的合成,其作用机制可能与miRNA-145靶向CRKL调节MAPK通路有关。